豚鼠ELISA试剂盒操作流程和常见问题解答

更新时间：2020-07-27

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　　豚鼠ELISA试剂盒操作流程和常见问题解答

　　豚鼠ELISA试剂盒操作流程如下：

　　（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。

　　（2）酶标板置4℃，包被过夜。

　　（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

　　（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。

　　（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

　　（6）洗板，同（4）。

　　（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

　　（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

　　（9）洗板，同（4）。

　　（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。

　　（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。

　　（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

　　（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

　　介绍一下豚鼠ELISA试剂盒实验操作的常见问题。

　　一、一次ELISA实验需要多长时间？

　　双抗体夹心ELISA法一次实验需要3.5-4小时，竞争ELISA法一次实验需要2-2.5小时。

　　二、血清样本如何处理？

　　全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　三、血浆样本如何处理？

　　建议选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，于1000×g离心15分钟，仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　四、细胞上清液样本如何处理？

　　检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（1000×g）。仔细收集上清。